二代测序在内脏利什曼病诊断中的应用

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临床问题

问题1

诊断黑热病最常用的病原学检查方法是

A.培养法

B.皮肤活组织检查

C.动物接种法

D.骨髓穿刺涂片镜检

E.血涂片镜检

问题2

一位65岁男性，有15天的不规则发热、疲劳和厌食病史。查体：脾大。实验室检查：贫血和中性粒细胞减少，临床考虑内脏利什曼病，以下哪项检查没有意义？

rK39试验

二代测序

流式细胞学检查

骨髓穿刺涂片镜检

病例介绍

患者年龄：65岁

患者性别：女

简要病史：

全身乏力、纳差、脾大4个月余来诊。

患者医院，被给予了各种不同的抗感染药物和解热药，但没有效果。

既往史：

身体健康。家住农村，最近没有外出旅行史。

体格检查：

体温39.6℃，心率90次/min，呼吸21次/min，血压/75mmHg。

全身无皮疹，浅表淋巴结未触及，腹部饱满，脾大，肋下平脐。

辅助检查：

白细胞计数2.15×10*9/L（正常3.5-9.5），

红细胞计数3.75×10*12/L（正常4.3-5.8），

血红蛋白浓度9.95g/dL，

血小板计数78×10*9/L（正常-），

中性粒细胞绝对计数为1.57×10*9/L（正常1.8-6.3），

白蛋白31.6g/L（正常35-55），

HDL0.55mmol/L（正常0.91），

甘油三酯1.83mmol/L（正常1.7），

D-二聚体37.58mg/L（正常0-0.55），

降钙素0.ng/mL（正常0-0.），

铁蛋白.5ng/mL（正常30-），

1,3-β-D-葡聚糖.50pg/mL（正常0-），

球蛋白27.0g/L（正常20-35），

纤维蛋白原2.75g/L（正常2-4），

血清半乳甘露聚糖曲霉抗原（0.27μg/L，正常0-0.85）。

T-斑点试验为阴性。

HIV和肿瘤标志物检测阴性。

除了超声检查脾脏肿大（70mm×mm），没有发现异常。

血培养和骨髓培养均阴性。

入院诊断：

恶性淋巴瘤（？）

嗜血细胞综合征（？）

不明原因传染病。

入院第2天，骨髓抽吸，骨髓细胞学检查显示骨髓发育异常，并有几个吞噬细胞，没有给予确定性诊断线索。

静脉注射潘西洛韦、比亚培南和口服伏立康唑治疗，但病情没有改善。

入院第5天，进行了亚基因组下一代测序（mNGS；IlluminaNextseq，Sandiego，CA，USA），24小时内检测到杜氏利什曼原虫婴儿亚种（个序列读长，占基因组覆盖率的0.%）。重组rK39抗原试纸条快速诊断提示利什曼病。

第二次骨髓抽吸找到利什曼原虫（图中巨噬细胞内可见利杜体），证实mNGS结果。

临床诊断：内脏利什曼病。

治疗经过：

两性霉素B脂质体(锋克松)治疗。

同时动态监测血常规、肝肾生物化学检测及腹部B型超声。

在治疗过程中，患者出现肾功能异常，疗程间歇后，肾功能恢复正常。患者右眼视乳头水肿伴出血，给予口服甲泼尼龙，右眼症状逐渐好转。

出院后外院继续治疗：

葡萄糖酸锑钠。

目前随访良好。

病例思考

骨髓穿刺涂片在巨噬细胞找到利什曼原虫是内脏利什曼病的确诊方法，但是由于骨髓涂片容易受到检验医师主观因素的影响，可能出现漏诊。相较于传统骨髓涂片寻找原虫的方法，二代测序在病原学诊断方面有重要的价值。

答案

第1题正确答案：D

解题思路：黑热病病原检查方法很多,有骨髓穿刺、淋巴结穿刺、脾穿刺涂片镜检,培养法、动物接种法和皮肤活组织检查等。其中以骨髓穿刺涂片镜检最为常用。

第2题

流式细胞学检查

既往笔记

二代测序技术结合常规方法检测脑炎/脑膜炎病原体

二代测序技术在1型Dent病患儿早期诊断中的应用

二代基因测序技术让治疗更精准

李永军

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