年鄂西北地区脑膜炎奈瑟

白癜风专家崔永玲 https://m-mip.39.net/disease/mipso_5444011.html}

摘要

目的分析鄂西北地区–年分离到的72株脑膜炎奈瑟菌（Nm）的药物敏感性及分子分型特征。方法对Nm菌株进行生化鉴定和血清学分群，并采用荧光聚合酶链式反应进行基因分群，用K-B纸片和E-test检测试纸条进行药敏试验；选取部分菌株进行多位点序列分型（MLST）和脉冲场凝胶电泳（PFGE）。结果血清分群结果为B群14株、C群10株、W群3株、E群1株、不可分群44株。基因分群结果：B群33株、C群10株、W群3株、E群1株，其他及不可分群25株。70株Nm菌株对复方新诺明、萘啶酸、环丙沙星、米诺环素、氯霉素5种抗生素的敏感率分别为7.14%、21.43%、28.57%、98.57%和98.57%，对美罗培南、亚胺培南、阿奇霉素、头孢曲松、头孢噻肟、青霉素和利福平均敏感。17株菌株共有12种序列型别，其中12株菌株不能归入现有克隆群，其他5株属于CC（4株）和CC（1株）。55株菌株分为48种不同的PFGE带型，带型相同的菌株其基因群亦相同。结论–年鄂西北地区分离的Nm菌株主要为B群；对复方新诺明、萘啶酸和环丙沙星具有较高的耐药性。MLST分型以CC为优势克隆。PFGE分型特征呈多态性，未出现优势带型。

前言

脑膜炎奈瑟菌（Neisseriameningitidis，Nm）是引起流行性脑脊髓膜炎（流脑）的病原菌，根据其荚膜多糖的特征至少可分为12个血清群，另有部分菌株血清群不可分，被归入血清不可分群菌株。在全球范围内，引起侵袭性流脑病例的血清群为A、B、C、W、X和Y型，不同地区和年代流行的菌群可存在较大差异。湖北省－年流脑监测未发现C群流脑，期间暴发与流行主要以A群为主，年我国将A+C群流脑纳入免疫规划，随着疫苗的广泛应用，Nm菌株的优势血清群正逐步发生变迁。年后湖北省流脑病例以B群为优势菌群，年检出5例B群Nm引起的脑膜炎病例，其中有1例死亡病例。年在南水北调源头鄂西北的丹江口市检测到由B群引起的危重流脑病例（病例仅1.8岁，未分离到菌株）。人是Nm菌株唯一宿主，部分健康人群携带Nm但并非致病。通过对健康人群带菌情况进行监测并研究Nm菌株的流行状况与变迁趋势。20世纪以来，鄂西北地区开展流脑监测工作数十年，该地区是国家流脑病例的重要监测点。本研究通过对－年鄂西北地区近10年的Nm菌株进行血清、基因分群、体外药敏试验和分子分型分析，以了解Nm菌株流行状况和变迁趋势，对该地流脑防控有重要意义。

01

材料与方法

1.1菌株来源72株Nm菌株来源于－年鄂西北地区健康人群。药敏质控菌株肺炎链球菌（Streptococcuspneumoniae）ATCC、大肠埃希菌（Escherichiacoli）ATCC和脉冲场凝胶电泳（PFGE）的分子质量标准参考菌株H均由中国疾病预防控制中心传染病预防控制所提供。1.2主要试剂哥伦比亚血平板和含5%脱纤维羊血的MH琼脂平板（广东环凯微生物科技有限公司）；革兰快速染色试剂（珠海贝索生物技术有限公司）；氧化酶试纸条（梅里埃，法国）；APINH生化鉴定条（梅里埃，法国）；Nm诊断血清（Remel，美国）；药敏纸片（BD，美国；OXOID，法国）（环丙沙星、利福平、复方新诺明、米诺环素、萘啶酸、美罗培南、亚胺培南、阿奇霉素、头孢曲松、氯霉素、头孢噻肟），E-test检测试纸条（梅里埃，法国）（青霉素）；QIAamp?DNAMiniKit（Qiagen，德国），PremixTaqRRA、DLMarker〔宝生物工程（大连）有限公司〕，2×EasyTaqPCRSuperMix（北京全式金生物技术有限公司），XbaⅠ和NheⅠ酶〔宝生物工程（大连）有限公司〕，SeaKemGoldAgarose琼脂糖（Cambrex，美国），蛋白酶K（Sigma，美国），十二烷基肌氨酸钠（Sigma，美国），Tris-HCl、乙二胺四乙酸、5×TBE（北京索莱宝科技有限公司）；引物、探针合成及聚合酶链式反应（PCR）产物测序由北京天一辉远生物科技有限公司完成。1.3主要仪器离心机（Eppendorf）、荧光定量PCR仪（Bio-RadCFX96）、自动凝胶成像仪（BioRad）、CHEFMAPPER脉冲场凝胶电泳系统（BioRad），麦氏比浊仪（梅里埃），恒温金属浴（杭州博日科技有限公司CHB-），生物Ⅱ级安全柜（Thermo），CO2培养箱（SHELLAB）。1.4方法1.4.1菌株鉴定复苏Nm菌株，选取单个菌落接种于哥伦比亚血平板，置5%CO2培养箱37℃培养20~24h，采用革兰染色、氧化酶试验、APINH生化和荧光PCR方法对菌株进行鉴定。1.4.2血清分群和基因分群采用玻片凝集法进行菌株的血清群鉴定，采用荧光PCR方法进行基因群鉴定。1.4.3药敏试验用无菌棉拭子刮取纯培养的Nm菌株于无菌的0.9%氯化钠制成0.5麦氏单位的菌悬液，然后均匀涂布于含5%羊血的Mueller-Hinton（MH）琼脂平板上，粘贴药敏纸片，于5%CO2培养箱中，37℃培养20~24h。质控菌株肺炎链球菌ATCC和大肠埃希菌ATCC做同步试验，根据版美国临床和实验室标准委员会（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute，CLSI）推荐的标准进行结果判定。1.4.4多位点序列分型（MLST）参照PubMLST（